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細胞器的分離方法
2009-5-18
6027
實驗室一般采用差速離心或密度梯度離心的方法得到分離細胞器。1.細胞膜的分離細胞膜又稱質膜,分離細胞膜有助于研究生物膜的結構與功能。一般說,紅細胞膜與線粒體膜的制備用差速離心法即可,其他細胞膜的分離可根據膜組分的密度大小不同,采用梯度離心后,分布于區(qū)域,可分離得到純制品。2.線粒體的分離線粒體普遍存在于真核細胞中,它是細胞呼吸的主要場所,細胞活動所需能量主要依靠在線粒體內進行氧化所產生的能,線粒體的分離主要靠差速分離。3.線粒體膜分離線粒體膜分離方法主要是密度梯度離心。4.聚核...
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離心分離的應用
2009-5-18
1510
根據顆粒在作勻速圓周運動時受到一個外向離心力的原理,發(fā)展了一種離心分離技術。這項技術應用很廣,諸如分離出化學反應后的沉淀物、天然的生物大分子、無機物、有機物,或者生物化學以及其他的生物學領域中常用來收集細胞、細胞器及大分子物質。在國內的蛋白質制藥行業(yè),離心的根本目的是濃縮和分離,將固體從液體中分離,或者將不同密度的懸浮物、液相通過沉降速度的差異分離開來。離心技術首先用于粗提收集菌體,其次是用于上柱前澄清,在藥物分析中可以用來檢定分子質量、純度及篩選新的藥物。
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離心機分離實例一
2009-5-18
1501
豬腎中微粒體膜組分粗品的分離儀器與試劑1.超速離心機(冷凍離心機)和轉頭2.勻漿緩沖液。50mmol/LHepes/NaOH(pH7.4),0.33mol/L蔗糖。3.重懸緩沖液。10mmol/LHepes/NaOH(pH7.4)。方法1.使用韋林攪拌器(要求4℃預冷)在10倍體積(1L)的勻漿緩沖液(要求4℃預冷),中破碎100g豬腎皮質。2.將勻漿物在離心機中于8000×g離心15min;3.小心地轉移出上清液,并將其在26000×g離心2min;4.用重懸緩沖液(要求4...
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分析超速離心機測定溶液大分子的沉降速度
2009-5-18
2025
分析超速離心機能用于測定溶液中大分子的沉降速度,這就是通常所說的沉降速度法;或者在較低的離心轉速下離心一定時間后,是其在離心分析池中各個平面位置的樣品溶質濃度不再有變化,建立起平衡狀態(tài),從而測定其大分子的分布,即所謂的沉降平衡法。其他一些沉降速度法和近似沉降平衡法等都是在次原理上派生出的。在速度沉降試驗中,離心機轉速可用到60000r/min,甚至更高,依試樣分子量大小而定。
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離心機歷史發(fā)展與分類
2009-5-18
1512
中國古代,人們用繩索的一端系住陶罐,手握繩索的另一端,旋轉甩動陶罐,產生離心力擠壓出陶罐中漿果的汁液,這就是離心分離原理的早期應用。工業(yè)離心機誕生于歐洲,比如19世紀中葉,先后出現紡織品脫水用的三足式離心機,和制糖廠分離結晶砂糖用的上懸式離心機。這些zui早的離心機都是間歇操作和人工排渣的。由于卸渣機構的改進,20世紀30年代出現了連續(xù)操作的離心機,間歇操作離心機也因實現了自動控制而得到發(fā)展。1879年,瑞典的拉瓦爾發(fā)明*臺從牛奶中分離奶油的分離機,它的轉鼓僅是一個空心的圓筒...
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離心機梯度分離細胞時介質的選擇
2009-5-15
1162
用離心機來分離細胞的梯度介質和密度梯度的制備受很多條件的制約,理想的梯度應滿足以下條件:對細胞無毒;能形成具有足夠密度的等滲介質;不滲入細胞;分級分離后容易從細胞中除去;形成梯度的粘度低。用來分類細胞的密度梯度形狀各種各樣,可以是連續(xù)梯度,也可以是不連續(xù)梯度,可以使用特殊梯度,如等動力梯度、等體積梯度、指數梯度和對數梯度。